第二節(jié) 滅菌方法與無菌操作
一、F與F0值的概念及其在滅菌中的意義與應(yīng)用。
D值：為在一定溫度條件下被滅菌物品中微生物數(shù)降低90%所需的時(shí)間。
Z值：為降低一個(gè)logD值所需升高的溫度數(shù)。單位為度，也可以看成滅菌時(shí)間減少到1/10所需升高的溫度值。
F值：在一系列溫度下給定Z值所產(chǎn)生的滅菌效力與在參比溫度T0下給定Z值所產(chǎn)生的滅菌效力相同時(shí)所相當(dāng)?shù)臏缇鷷r(shí)間(min)。常用于干熱滅菌。
F0值：Z為10℃時(shí)，一定滅菌溫度產(chǎn)生的滅菌效果與121℃ 產(chǎn)生的滅菌效力相同時(shí)所相當(dāng)?shù)臅r(shí)間(min)。也就是將被滅菌物品不同受熱溫度折算到與濕熱121℃滅菌時(shí)熱效力相當(dāng)?shù)臏缇鷷r(shí)間。稱為標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間。僅應(yīng)用于熱壓滅菌。
《GMP》規(guī)定F0值≥8min。實(shí)際應(yīng)在控制在12min。
二、常用的滅菌方法
(一)物理滅菌法：利用蛋白質(zhì)或核酸具有遇熱和對(duì)射線不穩(wěn)定的特性，采用加熱、輻射和過濾的方法，殺滅或除去微生物的技術(shù)。
1、干熱滅菌法：指利用火焰或干熱空氣達(dá)到殺滅微生物或消除熱原物質(zhì)的方法。
干熱滅菌法：高溫干熱空氣，穿透力差。適用于耐高溫但不宜濕熱滅菌的物品。如:玻璃器皿、纖維制品、金屬材質(zhì)的容器、固體藥品、液體石蠟等。
藥典規(guī)定：一般為160～170℃,120min以上;170～180℃，60min;熱原用250℃45min也可滅除。
2、濕熱滅菌法：指利用飽和水蒸氣、沸水或流通蒸汽殺滅微生物的方法(比熱大，穿透力強(qiáng)，廣泛應(yīng)用)
(1)熱壓滅菌：用壓力大于常壓的飽和水蒸氣、過熱水噴淋等方法殺滅微生物的方法。滅菌能力強(qiáng)，是熱力滅菌中最有效、應(yīng)用最廣的滅菌方法。此法適用于耐熱藥物、手術(shù)器械、培養(yǎng)基、無菌衣、膠塞等的滅菌。能殺滅所有的細(xì)菌繁殖體和芽胞。公認(rèn)的最可靠方法。
藥典規(guī)定：126℃×15min、121℃×30min或116℃×40min;標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間F0≥8min
使用注意事項(xiàng)：使用前檢查壓力表、溫度計(jì)、安全閥、排氣口等。避免事故。
使用時(shí)先開啟放氣活門，將滅菌器內(nèi)冷空氣排盡。
先預(yù)熱，再升壓和升溫，達(dá)到預(yù)定壓力和溫度后開始計(jì)時(shí)。
物品擺放不能太擠，以免妨礙蒸氣流通。滅菌完畢后，壓力降至0后開放氣閥，排盡蒸汽，溫度40℃以下后再開起門蓋。不能驟然減壓。
(2)流通蒸汽滅菌和煮沸滅菌：常壓下使用流通蒸氣或沸水滅菌。一般100℃,30-60min�？蓺绶敝承图�(xì)菌，但不一定殺滅芽孢。適用不耐高熱品種的輔助滅菌手段。
(3)低溫間歇滅菌：60℃-80℃加熱一小時(shí)，以殺死細(xì)菌繁殖體，室溫保溫24小時(shí)，再同法操作2-3次，直至全部芽胞殺滅。適用于必須采用加熱滅菌，但又不耐較高溫度的制劑。
3、濾過除菌：G6或0.22μm微孔濾膜濾除細(xì)菌。適用于熱敏性藥物尤其是生化制劑。應(yīng)在無菌環(huán)境下過濾操作。
4、紫外線滅菌：紫外線及其產(chǎn)生的微量臭氧所起的滅菌作用。254nm的紫外線最強(qiáng)。穿透力差，所以用于表面和空氣滅菌。
5、Co60-輻射滅菌：利用Co60-γ射線殺菌的方法。滅菌物品溫度變化小穿透力強(qiáng)。適用于熱敏性藥物，尤其是已包裝藥品的滅菌，但某些藥品經(jīng)輻射滅菌后可能引起化學(xué)成分及生物活性的變化。常用的輻射滅菌吸收劑量為25kGy(千格瑞)
6、微波滅菌：頻率在300MHz到300kMHz之間的電磁波。靠熱力滅菌，適用水性藥液的滅菌，對(duì)含少量水分的藥材飲片及固體制劑也有滅菌作用。
(二)化學(xué)滅菌法：用化學(xué)藥品殺滅微生物的方法。低濃度抑菌，高濃度殺菌。
1、消毒劑消毒：殺死病原微生物的方法。常用物體表面滅菌。
0.1%-0.2%新潔爾滅溶液;3%-5%的煤酚皂溶液;75%乙醇等
2、化學(xué)氣體滅菌法：指利用化學(xué)藥品的氣體或產(chǎn)生的蒸汽殺滅微生物的方法。
環(huán)氧乙烷滅菌：環(huán)氧乙烷分子易穿透塑料、粉末等固體物質(zhì)，可用于不耐熱的散劑等固體藥料及其他固體器具的滅菌。含氯物品及能吸附環(huán)氧乙烷的物品不宜采用本法滅菌。
氣態(tài)過氧化氫、甲醛、臭氧等通過加熱產(chǎn)生蒸汽進(jìn)行空氣環(huán)境滅菌。
三、無菌操作法
1.無菌操作法：必須在無菌控制條件下進(jìn)行的一種操作方法。
2.適用：不能用其他方法滅菌的無菌制劑。多為注射劑、滴眼劑等。
3.在無菌操作室或無菌操作柜內(nèi)進(jìn)行。
4.操作要點(diǎn)與注意事項(xiàng)為：
�、賴�(yán)密控制操作環(huán)境的潔凈度;
�、谙嚓P(guān)設(shè)備、包裝容器、塞子等應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒缇�，并防止再次污�?
�、鄄僮鬟^程的無菌保證應(yīng)通過培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)驗(yàn)證;
④嚴(yán)密監(jiān)控操作環(huán)境的無菌空氣質(zhì)量、操作人員素質(zhì)、各物品的無菌性;
�、轃o菌操作工藝應(yīng)定期進(jìn)行驗(yàn)證。
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