因此氨水為最常用的堿化試劑。
提取溶劑應(yīng)具備下列條件:
① 與水不相混溶,沸點低,對生物堿的溶解度大,而對其它物質(zhì)的溶解度應(yīng)盡可能最小。
② 與生物堿或堿化試劑不起任何反應(yīng)。
常用者為乙醚和氯仿,其中氯仿應(yīng)用更為廣泛。
提取溶劑的用量通常應(yīng)提取4次,第一次用量至少應(yīng)為水液體積的一半,以后幾次所用溶劑的體積應(yīng)各為第一次的一半。如果水液體積很小時,第一次提取溶劑的用量則應(yīng)與水液相等。
提取終點的確定取最后一次的提取液約0.5ml,置小試管中,加鹽酸或硫酸(0.1mol/L)1ml,放水浴上將有機溶劑蒸去,放冷,滴加生物堿沉淀劑(如碘化鉍鉀試液等)1滴,無沉淀產(chǎn)生,即為提取已完全。
指示劑的選擇磷酸可待因片劑分析:
酸性染料比色法原理:在適當?shù)膒H介質(zhì)中,生物堿類藥物(B)可與氫離子結(jié)合成鹽(BH+),一些酸性染料(如磺酸酞類的指示劑:溴麝香草酚藍、溴甲酚綠等)在此介質(zhì)中能解離為陰離子(In-),同時,陽離子和陰離子又能定量地結(jié)合成有色的離子對化合物,即離子對。
離子對被合適的有機溶劑提取后,形成有色溶液,可供比色測定。
影響定量分析的因素1.水相的最適pH值2.酸性染料的影響提取完全是提取常數(shù)和酸性染料陰離子的濃度密切相關(guān)的,而提取常數(shù)的大小由是與B-的種類和有機溶劑的選擇密切相關(guān)的。一般用的有甲基橙、溴麝香草酚藍(BTB)和溴甲酚綠等。
3.有機溶劑的影響離子對提取常數(shù)的大小還與有機溶劑的性質(zhì)有關(guān)。通常有機溶劑與離子對形成氫鍵的能力強,則提取效率高,如氯仿和二氯甲烷等具有中等程度的提取率,并且提取的選擇性也較好,為最常用的有機溶劑。
4.水分的影響有有機溶劑提取有色的離子對時,應(yīng)嚴防水分的混入。
5.共存物的影響:一般賦形劑,重型、酸性乙基弱堿性的物質(zhì)均不干擾測定,強酸可改變?nèi)玖先芤夯蚓彌_液的pH,因而對測定有干擾。
以上五種影響因素中,水相的最適pH和有機溶劑對離子對的提取完全是酸性染料比色法的試驗關(guān)鍵。
應(yīng)用與實例硫酸阿托品片劑紫外分光光度法利血平含量測定,注意避光操作。
糖類和苷類藥物單糖和雙糖分子中有不對稱碳原子,均具有一定的比旋度。
鑒別試驗1.灼燒試驗:糖類用直火加熱,先熔融膨脹,后燃燒并發(fā)生焦糖臭,遺留多量的炭。蔗糖的鑒別可應(yīng)用本試驗。
2.Fehling反應(yīng)單糖或含有半縮醛基的雙糖分子結(jié)構(gòu)中,均有醛基或酮基,都具有還原性。Fehling反應(yīng)是在堿性酒石酸銅試液(Fehling試液)中,糖將銅離子還原,生成紅色的氧化亞銅沉淀。
葡萄糖的鑒別可用此反應(yīng)(無水葡萄糖、葡萄糖注射液、葡萄糖氯化鈉注射液和莪術(shù)油葡萄糖均用Fehling反應(yīng))
蔗糖的鑒別:加硫酸煮沸,用氫氧化鈉中和,再加堿性酒石酸銅試液,加熱,生成氧化亞銅的紅色沉淀。
葡萄糖和乳糖的雜質(zhì)檢查葡萄糖的一般檢查項目:酸度、氯化物和硫酸鹽;溶液的澄清度與顏色;乙醇溶液的澄清度;亞硫酸鹽與可溶性淀粉。
葡萄糖注射液中5-羥基糠醛的測定:紫外分光光度法。
乳糖的雜質(zhì)檢查:利用蛋白質(zhì)類雜質(zhì)遇硝酸汞試液產(chǎn)生的白色絮狀沉淀,進行特殊雜質(zhì)“蛋白質(zhì)”的檢查。
原料藥的含量測定:葡萄糖、乳糖和蔗糖不規(guī)定含量測定,規(guī)定比旋度的范圍。
制劑:葡萄糖注射液的含量測定:旋光度法。
測定中加入氨試液的作用:由于藥用葡萄糖是D-葡萄糖,而D-葡萄糖有α和β兩種互變異構(gòu)體,因而藥用葡萄糖是他們的混合物,比旋度相差甚遠,而在水溶液中逐漸平衡,稱作變旋。加熱、加酸或加弱堿可加速平衡。
計算因素1.0426的由來:
換算為含稅葡萄糖濃度(c‘)時,則應(yīng)為:
葡萄糖氯化鈉注射液含量測定:硝酸銀滴定法,每1ml硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當于5.844mg的NaCl.加糊精溶液以形成保護,使氯化銀沉淀呈膠體狀態(tài),則具有較大的表面,有利于對指示劑的吸附,有利于滴定終點的觀察。
加硼砂溶液是為了增加pH值,因為本品pH值過低,而pH值低于3.5時,則五沉淀出現(xiàn)。加入2.5%硼砂溶液2ml后,溶液pH值為7,可促使熒光黃電離,以增大熒光黃陰離子的有效濃度,使重點變化敏銳。
苷類藥物苷類為糖的衍生物(如氨基糖、糖醛酸等)與另一非糖有機化合物通過糖的端基碳原子連接而成的化合物。
鑒別試驗:
1.Keller-Kiliani反應(yīng)α-去氧甲基五碳糖的反應(yīng)α-去氧糖類,如洋地黃毒糖和磁麻糖,是由糖類分子中與羰基相鄰近的“CHOH”基失去氧,轉(zhuǎn)變?yōu)椤癈H2”后的結(jié)構(gòu)。具有較大的活潑性,由α-去氧糖與苷元結(jié)合的生成物(即苷類)容易水解。
將甾體強心苷溶于含有微量FeCl3(1滴9% FeCl3)的冰醋酸1~2ml中,沿管壁緩緩加入濃硫酸1~2ml,使成兩液層。兩液層交界面處顯棕色(甲地高辛顯紫色);醋酸層顯藍色或藍綠色,放置1h后顯靛藍色。
2.Kedde反應(yīng)苷元的不飽和內(nèi)酯側(cè)鏈反應(yīng)。
甾體強心苷元的C17上常有α-β或β-γ的不飽和內(nèi)酯,即丁烯內(nèi)酯,在堿性水溶液中易與芳香硝基化合物形成有色的絡(luò)合陰離子。
Kedde反應(yīng)用于去乙酰毛花苷的鑒別。
加乙醇溶解后加二硝基苯甲酸試液與乙醇制氫氧化鉀試液各10滴,搖勻后,溶液即顯紅紫色。
3.色譜法① 紙色譜法:用于地高辛的鑒別② 薄層色譜法:用于去乙酰毛花苷及其注射液的鑒別,采用硅藻土G薄層板。
③ 高效液相色譜法:用于甲地高辛及其片劑的鑒別特殊雜質(zhì)的檢查藥物 特殊雜質(zhì) 允許限量 檢查方法洋地黃毒苷 洋地黃皂苷 本品10mg溶于2ml乙醇后,加膽甾醇的醇溶液,10min內(nèi),不得發(fā)生沉淀地高辛 洋地黃毒苷 6% 紙色譜法甲地高辛 有關(guān)物質(zhì) 5% 高效液相色譜法去乙酰毛花苷 有關(guān)物質(zhì) 10% 薄層色譜法含量測定1.比色法:甾體強心苷元C17上的丁烯內(nèi)酯部分是非;顫姷模苋菀缀头枷阆趸衔铮ㄈ鐗A性三硝基苯酚試液)形成絡(luò)合陰離子。所得絡(luò)合物在可見光去具有特征的最大吸收峰(λmax為485~495nm)。
本法用于地高辛、去乙酰毛花苷及其注射液的含量測定2.熒光法:利用L-抗壞血酸與過氧化氫等實際可使地高辛或洋地黃毒苷產(chǎn)生熒光的原理,提高了定量分析的靈敏度,從而可用于每片含主藥量分別僅為0.25mg和0.1mg的片劑的含量測定。
地高辛片含量,含量勻度(限度為20%),溶出度(限度為65%,轉(zhuǎn)籃,100r/min,60min)
甲地高辛溶出度測定與地高辛一樣,限度規(guī)定相同。
3.色譜法:
① 柱色譜法:用于洋地黃毒苷原料藥測定的純化處理② 高效液相色譜法:用于甲地高辛及其片劑的含量測定,內(nèi)標:洋地黃毒苷。
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