2013年藥學(xué)類輔導(dǎo)：特異性抗體的檢測(cè)特異性抗體

　　病毒感染后通常誘發(fā)針對(duì)病毒一種或多種抗原免疫應(yīng)答，特異性抗體效價(jià)升高或lgM抗體出現(xiàn)有輔助臨床診斷的價(jià)值。

　　(一)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CF) CF分二個(gè)階段：1.抗原與抗體(一個(gè)為已知，一個(gè)為待檢)混合，加入定量補(bǔ)體，若抗原與抗體相對(duì)應(yīng)，則補(bǔ)體被消耗;2.在上述混合物中加入溶血素致敏的綿羊紅細(xì)胞，若補(bǔ)本已與抗原抗體復(fù)合物完全結(jié)合，沒(méi)有剩補(bǔ)體存在，那么綿羊紅細(xì)胞不會(huì)溶血，結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明待檢標(biāo)本中有特異性存在，出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果時(shí)血清標(biāo)本最高稀釋度為抗體的效價(jià)。反之為陰性結(jié)果。由于補(bǔ)體結(jié)合抗體產(chǎn)生早，消失快，適于診斷病毒近期感染。(表23-5)。

　　*此例的抗體效價(jià)升高4倍，有診斷意義。

　　(二)中和試驗(yàn)(NT)在活體或活細(xì)胞內(nèi)測(cè)定病毒被特異性抗體中和、而失去致病力的試驗(yàn)。試驗(yàn)時(shí)：①須先測(cè)出病毒的半數(shù)致死量(LD50)或半數(shù)感染量(ID50);②隨即取活病毒與被試血清按不同比例混合，放置1～2小時(shí)讓其充分中和;③將病毒與血清混合液注入各組動(dòng)物、雞胚或組織細(xì)胞培養(yǎng)管內(nèi)培養(yǎng);④根據(jù)動(dòng)物、雞胚死亡數(shù)或細(xì)胞病變的管數(shù)，計(jì)算出百分比(%)，然后再計(jì)算這些試驗(yàn)對(duì)象中的半數(shù)免于死亡或免于致病所需要的最少量血清(或最大量的病毒)，就是該血清的中和抗體效價(jià)(稱為50%終點(diǎn)的中和效價(jià))。診斷病毒性疾病時(shí)，須取病人雙份血清同時(shí)做對(duì)比試驗(yàn)，病后血清的中和抗體效價(jià)也必須超過(guò)病初血清4倍以上，才能確診(表23-6)。用此法鑒定病毒時(shí)，須將病毒分別與免疫血清及血清正常血清(對(duì)照)混合做對(duì)比試驗(yàn)，免疫血清比正常血清多中和50～100倍劑量的病毒，才能斷定是該病毒。、

　　表23-6　病人雙份血清的病毒中和試驗(yàn)結(jié)果(組織細(xì)胞培養(yǎng)的中和試驗(yàn))

　　說(shuō)明：①TCID50=組織培養(yǎng)半數(shù)感染劑量。

　�、诿糠N稀釋度接種4支組織細(xì)胞培養(yǎng)管;0=未出現(xiàn)細(xì)胞致病作用;+=出現(xiàn)細(xì)胞致病作用。

　　③此例的病后血清中和抗體效價(jià)比病初血清增高8倍，有診斷意義。

　　病毒中和抗體的特異性高，持續(xù)時(shí)間久，以往受顯性或隱性感染后，血中可長(zhǎng)期存在中和抗體，所以適用于流行病學(xué)調(diào)查或人群免疫水平研究，但因試驗(yàn)方法繁雜，耗用動(dòng)物、雞胚或細(xì)胞培養(yǎng)較多，故一般不作常規(guī)使用。

　　(三)血凝抑制試驗(yàn)(Hemagglutinationinhibition test,HIT)某些病毒(流感病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、腦炎病毒等)能凝集紅細(xì)胞，而抗體與這些病毒結(jié)合后卻能阻止它們的凝集，若雙份血清有≥4倍以上滴度增高，也可用于診斷這類病毒感染。本法簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)、特異性高，常用于流行病學(xué)調(diào)查等。

　　(四)lgM捕捉ELISA 特異性lgM出現(xiàn)于病毒感染的早期或病毒感染的活動(dòng)期，因此可從急性期病人單份血清中檢出特異性lgM，這是病毒感染實(shí)驗(yàn)室早期診斷的可靠方法。實(shí)驗(yàn)中先用u鏈血清包被微培板孔，用以捕捉血清標(biāo)本中的lgM類抗體，再加入特異性病毒抗原及酶標(biāo)抗體以證實(shí)特異性lgM的存在�，F(xiàn)已廣泛用于病毒病的早期診斷。在先天性感染中，lgM檢測(cè)有特殊意義，因lgM不能通過(guò)胎盤，新生兒血清中發(fā)現(xiàn)抗病毒lgM提示為宮內(nèi)感染。