2013免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：免疫金銀染色

　　免疫金銀染色(immunogoldsilverstaining，IGSS)是在金免疫技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的更為敏感的技術(shù)，由Holgate在1983年首先建立成功。

　　一、原理

　　金免疫技術(shù)測(cè)定的產(chǎn)物上的金顆�？蓪�銀離子還原成銀顆粒，在金顆粒表面形成一色澤更深的黑色層，因而增強(qiáng)了金免疫技術(shù)的敏感性。

　　二、方法

　　IGSS的主要試劑為銀染液。以往一般用硝酸銀染液，但其對(duì)光的穩(wěn)定性較差;改用乙酸銀溶液后穩(wěn)定性加強(qiáng)，配方如下：

　　A液：0.22%乙酸銀溶液(乙酸銀110mg溶于去離子水50ml中)。

　　B液：50%阿拉伯樹(shù)膠溶液(阿拉伯樹(shù)膠50g溶于去離子水100ml中，每天振搖3次，5天后過(guò)濾使用)。

　　C液：1%對(duì)苯二酚溶液(對(duì)苯二酚500mg溶于0.55mol/LpH3.8的檸檬酸鹽緩沖液50ml中)。

　　D液：在C液中加入B液10～40ml。

　　使用前將A液和D液等量混合，即為銀染液。

　　IGSS多用于組織化學(xué)檢測(cè)。對(duì)于以膜為載體的免疫學(xué)試驗(yàn)，金染色后的銀加強(qiáng)可按下法進(jìn)行：將膜用0.05mol/LpH8.2TBS浸洗3次，每次3min，用去離子水沖洗一次，浸入0.05mol/LpH3.8檸檬酸緩沖液平衡5min，浸入銀染液中，37℃25min。將膜取出，用去離子水沖洗，放入定影液1min，去離子水沖洗，空氣干燥。

　　三、應(yīng)用

　　金免疫技術(shù)的敏感度低于其它標(biāo)記免疫技術(shù)，經(jīng)銀加強(qiáng)染色后敏感度可與熒光免疫技術(shù)和酶免疫技術(shù)相當(dāng)。因此近年來(lái)發(fā)展了不少IGSS方法以替代熒光免疫技術(shù)，可以在普通顯微鏡下進(jìn)行檢測(cè)。

　　在以膜為載體的免疫技術(shù)(如免疫印跡法)中，也有應(yīng)用IGSS以替代酶免疫法。也有用金標(biāo)記抗體代替酶標(biāo)記抗體進(jìn)行類似ELISA的測(cè)定，最后進(jìn)行銀加強(qiáng)，其敏感度與ELISA相仿。