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第五章 分光光度法
第一節(jié) 紫外—可見(jiàn)分光光度法
一、基本原理
紫外—可見(jiàn)吸收光譜屬分子吸收光譜，是由分子的外層價(jià)電子躍遷產(chǎn)生的。
Lambert-Beer定律 A=ECL
A為吸收度，E為吸收系數(shù)，C為被測(cè)物質(zhì)溶液濃度，L為光路長(zhǎng)度。吸收系數(shù)E是物質(zhì)的物理常數(shù)，隨濃度C單位的不同有不同表示方法。
藥品檢驗(yàn)中使用百分吸收系數(shù) ，物理意義是當(dāng)吸光物質(zhì)溶液濃度為1%(1g/100 ml)，液層厚度為1cm時(shí)的吸收度。
二、可見(jiàn)-紫外分光光度計(jì)
光源-單色器-吸收池-檢測(cè)器-數(shù)據(jù)記錄和處理
1.光源：紫外區(qū)采用氫燈或氘燈，可見(jiàn)光區(qū)采用鎢燈
2.單色器：狹縫寬度大，單色光純度差;寬度過(guò)小，檢測(cè)靈敏度降低
3.吸收池：玻璃池適用于370nm以上的可見(jiàn)光區(qū)，石英池適用于紫外、可見(jiàn)光區(qū)，通常僅在紫外光區(qū)使用
三、吸收度的測(cè)定方法
1.對(duì)溶劑的要求：能充分溶解樣品，與樣品無(wú)相互作用，揮發(fā)性小，在測(cè)定波長(zhǎng)處的吸收應(yīng)符合要求
2.空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)：將溶劑裝入?yún)⒈瘸兀{(diào)節(jié)吸收度為0，去除溶劑和容器吸收、光散射、反射的影響。
3.測(cè)定波長(zhǎng)確證
4.供試品溶液濃度：使吸收度在0.3～0.7范圍內(nèi)。
5.狹縫寬度：以減少狹縫寬度時(shí)，供試品溶液吸收度不再增加為準(zhǔn)。
四、應(yīng)用
1.鑒別
(1) 對(duì)比吸收光譜特征參數(shù)：核對(duì)供試品溶液λmax、 、A是否符合規(guī)定�？赏瑫r(shí)用幾個(gè)峰位作為鑒別依據(jù)
(2) 比較吸收度比值一致性：吸收峰較多時(shí)，規(guī)定幾個(gè)波長(zhǎng)處吸收度比值作為鑒定標(biāo)準(zhǔn)
(3) 對(duì)比吸收光譜一致性
2.雜質(zhì)檢查
藥物在紫外-可見(jiàn)光區(qū)有明顯吸收，而雜質(zhì)吸收弱;或雜質(zhì)有明顯吸收而藥物無(wú)吸收，可通過(guò)控制吸收度限度來(lái)控制雜質(zhì)量。
3.含量測(cè)定
(1) 對(duì)照品比較法：供試品溶液和對(duì)照品溶液濃度及測(cè)定條件應(yīng)盡可能一致
(2) 吸收系數(shù)法：需對(duì)儀器進(jìn)行嚴(yán)格校正和檢定
(3) 計(jì)算分光光度法：通過(guò)數(shù)學(xué)處理消除樣品中干擾組分的干擾
(4) 比色法：供試品與對(duì)照品同時(shí)操作
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