2010執(zhí)業(yè)藥師考試藥學專業(yè)知識(一)復習要點(12)

　　(一)鑒別 供試液主峰的保留時間與對照液一致

　　(二)雜質(zhì)檢查 《中國藥典》用HPLC雜質(zhì)檢查方法有5種

　　1)內(nèi)標法加校正因子

　　校正因子( f ) =(As /Cs) / (AR/CR) 含量 (Cx) = f · Ax / (AS /CS )

　　2)外標法 含量 (Cx) = CR · (Ax / AR)

　　3)加校正因子的主成分自身對照法：對照溶液為供試品溶液的稀釋溶液

　　4)不加校正因子的主成分自身對照法 無雜質(zhì)對照品

　　5)面積歸一化法

　　(三)含量測定 內(nèi)標法加校正因子法、外標法

　　§4. 氣相色譜法 gas chromatography， GC

　　一、基本原理

　　采用氣體流動相;不適于難揮發(fā)和熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)的分析;各組分按K大小順序依次被載氣帶出色譜柱產(chǎn)生分離

　　二、氣相色譜儀

　　(一)載氣源 FID多用氮氣或氦氣為載氣，氫氣為燃氣，空氣為助燃氣。TCD多用氦氣或氫氣為載氣;ECD多用氮氣或氬氣為載氣。

　　(二)進樣方式 可分為溶液直接進樣、頂空進樣

　　(三)色譜柱 填充柱或毛細管柱

　　(四)柱溫箱 控溫精度在±1℃

　　(五)檢測器：

　　1.火焰離子化檢測器(FID)

　　氫氣為燃氣，空氣為助燃氣。檢測器溫度應高于柱溫，并不低于150℃®¾防水氣凝結(jié)，(否則倒流)，通常為 250 ℃ - 350 ℃

　　2. 氮磷檢測器NPD 適于含氮、磷元素的藥物

　　3. 火焰光度檢測器FPD 適于含氮、硫元素的藥物

　　4. 電子捕獲檢測器ECD 主要用于含鹵素藥物

　　5. 質(zhì)譜檢測器MS 能給出相應的結(jié)構(gòu)信息

　　6. 熱導檢測器 TCD 檢測組分的濃度變化

　　濃度型：TCD、電子捕獲檢測器ECD

　　(六)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)

　　三、常用固定液與載體

　　1. 常用的固定液：常用的鯊魚烷是標準非極性固定液

　　硅氧烷類 ：SE-30、SE-54、OV-17、OV-25等

　　醇類：聚乙二醇(PEG)是最常用的固定液之一

　　2. 載體(擔體) 作用：承載固定液

　　為化學惰性的多孔性微粒，常用硅藻土型載體：紅色載體和白色載體。

　　3. 毛細管色譜柱：開管型毛細管柱和填充型毛細管柱

　　★★四、色譜系統(tǒng)適用性試驗

　　在各品種項下規(guī)定色譜條件下，除檢測器種類、固定液品種及特殊指定的色譜材料不得改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑、長度、載體牌號、粒度、固定液涂布濃度、載氣流速、柱溫、進樣量、檢測器的靈敏度等，均可適當改變。

　　(1)色譜柱的理論踏板數(shù)(n) n=5.54(tR/ Wh/2)2

　　(2) 分離度 (R) R=2(tR2-tR1)/(W1+W2) R ³ 1.5

　　(3)重復性： RSD ≤2.0%

　　(4)拖尾因子(T)： 0.95 ~ 1.05

　　六、應用

　　(一)鑒別 供試液主峰的保留時間與對照品溶液一致

　　(二)雜質(zhì)檢查： 內(nèi)標法加校正因子、外標法、面積歸一化法和標準溶液加入法

　　(三)在含量測定中的應用： 內(nèi)標法、外標法和標準溶液加入法

　　§5. 電泳法 (electrophoresis)

　　在電場的作用下，帶電顆粒向其所帶電荷相反的電極方向移動， 根據(jù)各組分淌度的不同而得到分離的方法。

　　(一)基本原理

　　v=mE

　　雙電層與電滲：電泳所用的支持物(如濾紙)在溶液中帶負電，而使接近其表面的緩沖液帶正電，且形成雙電層。在電場的作用下，帶正電的緩沖液整體向負極移動，形成電滲。

　　影響電泳分離的條件：(1)緩沖液的pH值和離子強度 (2)電場強度 (3)樣品濃度

　　★★(二)各類電泳法

　　(1) 紙電泳法

　　(2) 醋酸纖維素薄膜電泳法

　　(3) 瓊脂糖凝膠電泳法

　　(4) 聚丙烯酰胺凝膠電泳法

　　(5) SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法 測定蛋白質(zhì)分子量

　　(三)應用 鑒別、分子量測定、純度測定

　　二、毛細管電泳法(capillary electrophoresis，CE)

　　毛細管電泳的分離模式：

　　1.毛細管區(qū)帶電泳(CZE)

　　2.毛細管凝膠電泳(CGE)

　　3.毛細管等速電泳(CITP)

　　4.毛細管等電聚焦電泳(CIEF)

　　5.膠束電動毛細管色譜 (MEKC或MECC)

　　6.毛細管電色譜(CEC)