醫(yī)師實踐技能考試輔導(dǎo)：排斥反應(yīng)的免疫檢驗

　　排斥反應(yīng)發(fā)生時，受者體內(nèi)的免疫應(yīng)答將發(fā)生一系列變化，檢測機體免疫狀態(tài)可診斷或推測排斥反應(yīng)的發(fā)生。

　　一、體液免疫水平檢測

　　相關(guān)免疫指標(biāo)包括：AB0血型、其他血型和HLA抗體，以及抗供者組織細胞抗體、血管內(nèi)皮細胞抗體、冷凝集素抗體等。測定方法可以根據(jù)相應(yīng)抗原的特性，采取各種交叉配型、補體依賴的細胞毒性試驗等。

　　二、細胞免疫水平檢測

　　包括參與細胞免疫的有關(guān)細胞數(shù)量、功能和細胞因子水平的檢測。

　　1.外周血T細胞及其亞類的計數(shù)：測定T細胞總數(shù)、CD4+亞群、CD8+亞群及CD4+T/CD8+T比值。在急性移植排斥反應(yīng)臨床癥狀出現(xiàn)前1～5天，CD4+T/CD8+T、細胞比值可升高至1.2以上，而此比值小于1.08時則懷疑有感染的可能。

　　2.4hT細胞轉(zhuǎn)化試驗是檢測受者致敏T細胞的一種方法。該法取外周血單個核細胞，不經(jīng)培養(yǎng)直接加入3H-TdR，置C02培養(yǎng)箱溫育4小時，是一項預(yù)報急性排斥反應(yīng)危象較為滿意的試驗。

　　3.NK細胞活性測定：大量免疫抑制劑的應(yīng)用，造成受者機體NK細胞活性的抑制，但在急性排斥反應(yīng)時明顯升高。

　　4.細胞因子的測定：IL-1、IL-2、IL4、IL-6、IFN-7和slL-2R等的檢測，已作為監(jiān)測移植排斥反應(yīng)的常用項目。這些細胞因子的水平均可升高。應(yīng)用免疫標(biāo)記法檢測受者血清中細胞因子時只能對接受移植物前后的變化進行對比分析，僅作參考。血清肌酐值和IL-2R若同時增高，則對急性移植排斥反應(yīng)的發(fā)生有診斷意義。骨髓移植中發(fā)生的GVHR是移植排斥反應(yīng)的特殊類型。臨床實驗室可采用有限稀釋分析法，計數(shù)供者外周血單個核細胞中分泌IL-2的特異性T細胞比值。此比值≥1/10萬，判斷為有發(fā)生GVHR的可能;若小于此比值，則提示不發(fā)生GVHR.該法為單向MLC，但又不同于一般的MLC.供者外周血單個核細胞經(jīng)有限稀釋法稀釋成單個細胞，然后在體外兩次接受受者細胞的刺激，即供者外周血稀釋后與20Gy放射性照射的受體外周血單個核細胞混合培養(yǎng)l4小時，洗去上清液后再加入40Gy放射性照射的經(jīng)EB病毒轉(zhuǎn)化的宿主B細胞(該細胞本身并不產(chǎn)生IL-2，但對供者T細胞具有更強的刺激和誘生IL-2之作用)，經(jīng)24小時培養(yǎng)后，取上清液測IL-2活性。

　　5.粘附分子及其配體的檢測：粘附分子及其配體的表達與急性排斥反應(yīng)的發(fā)生密切相關(guān)。諸如ELAM-1、VCAM、ICAM和HLA分子等。

　　三、補體水平的檢測

　　在移植物遭受排斥時，補體成分的消耗增加，含量減少。血清總補體和單個補體成分活性或補體的裂解產(chǎn)物，如C3a、C3b、C3d等的測定，對于了解補體的活性很有幫助。檢測方法有：免疫電泳、免疫標(biāo)記技術(shù)等。檢測凝血系統(tǒng)、纖溶系統(tǒng)、激肽系統(tǒng)活性，也有助于補體活性水平的判斷。

　　四、急性時相反應(yīng)物質(zhì)的檢測

　　C反應(yīng)蛋白(CRP)、IL-1、IL-6、TNF-a以及HSP等炎癥分子，在發(fā)生感染和自身免疫性疾病時均有不同程度的增高。同種異基因干細胞移植時CRP升高，移植后發(fā)生細菌或真菌感染時CRP增高更為顯著。在肝、腎移植中，CRP的動態(tài)測定結(jié)果與器官移植后并發(fā)癥的發(fā)生相關(guān)，且比白細胞計數(shù)或發(fā)燒更敏感。CRP的測定尚未作常規(guī)項目，但外科創(chuàng)傷、急性排斥反應(yīng)的發(fā)生以及感染等的關(guān)系，正被認(rèn)可。