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糖鏈的結(jié)構(gòu)測(cè)定
要測(cè)定糖鏈的結(jié)構(gòu)主要是解決三個(gè)問(wèn)題：?jiǎn)翁堑慕M成、糖與糖的連接位置和順序、苷鍵的構(gòu)型。
(一)分子量的測(cè)定
苷的分子量測(cè)定目前大多采用質(zhì)譜法。但由于其極性大導(dǎo)致熱揮發(fā)性差，電子轟擊法(EI)和化學(xué)電離(CI)常不能得到理想的結(jié)果，一般采用場(chǎng)解吸(FD)、快原子轟擊(FAB)、電噴霧(ESI)等方法獲得[M+H]+、[M+Na]+等準(zhǔn)分子離子峰。
(二)單糖的鑒定
首先要了解苷中糖鏈由哪些單糖所組成，各種單糖之間的比例如何。一般是將苷鍵全部酸水解，然后用紙色譜檢出單糖的種類。經(jīng)顯色后用薄層掃描儀求得各種糖的分子比。單糖的定性定量也可以通過(guò)苷全甲基化并水解后得到的甲基化單糖的氣相色譜測(cè)定，但需要各種各樣的甲基化單糖作標(biāo)準(zhǔn)品。
(三)單糖之問(wèn)連接位置的確定
將苷全甲基化，然后水解苷鍵，鑒定所有獲得的甲基化單糖，其中游離的一OH的部位就是連接位置。水解要盡可能溫和，否則會(huì)發(fā)生去甲基化反應(yīng)和降解反應(yīng)。
(四)糖鏈連接順序的確定
(五)苷鍵構(gòu)型的決定
糖的鑒定
苷類水解所得到的各種單糖和低聚糖的結(jié)構(gòu)大多數(shù)是已知的，只要與各種已知糖的標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照就可加以鑒定。但由于糖的水溶性很大，不易獲得結(jié)晶，有些物理常數(shù)無(wú)法測(cè)定，給印證工作帶來(lái)困難。以前多用化學(xué)方法制成衍生物，再作分離鑒定，步驟多，工作量大。而現(xiàn)在各種色譜技術(shù)的應(yīng)用，給糖類的鑒定帶來(lái)了極大的方便。
(一)紙色譜
(二)薄層色譜
(三)氣相色譜
(四)離子交換色譜
(五)液相色譜
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