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一、A1
1、
【正確答案】 A
【答案解析】 TMB是一種優(yōu)于OPD的新型HRP色原底物。TMB經(jīng)HRP作用后變?yōu)樗{(lán)色，加入硫酸終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色，最大吸收峰波長為450nm。
2、
【正確答案】 E
【答案解析】 OPD被認(rèn)為是HRP最為敏感的色原底物之一。OPD在HRP的作用下顯橙黃色，加強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)后呈棕黃色，最大吸收峰在492nm波長。
3、
【正確答案】 B
【答案解析】 TMB是一種優(yōu)于OPD的新型HRP色原底物。TMB經(jīng)HRP作用后變?yōu)樗{(lán)色，加入硫酸終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色，最大吸收峰波長為450nm。
4、
【正確答案】 B
【答案解析】 用于酶免疫技術(shù)的HRP，其RZ值應(yīng)大于3.0。
5、
【正確答案】 E
【答案解析】 1.酶的活性要強(qiáng)，催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高，純度高。
2.易與抗體或抗原偶聯(lián)，標(biāo)記后酶活性保持穩(wěn)定，且不影響標(biāo)記抗原與抗體的免疫反應(yīng)性。
3.作用專一性強(qiáng)，酶活性不受樣品中其他成分的影響，受檢組織或體液中不存在與標(biāo)記酶相同的內(nèi)源性酶或抑制物。用于均相酶免疫測(cè)定的酶還要求當(dāng)抗體與酶標(biāo)抗原結(jié)合后，酶活性可出現(xiàn)抑制或激活。
4.酶催化底物后產(chǎn)生的產(chǎn)物易于判斷或測(cè)量，方法簡單易行、敏感和重復(fù)性好。
6、
【正確答案】 A
【答案解析】 酶免疫測(cè)定根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離結(jié)合的與游離的酶標(biāo)記物而分為均相和異相這兩類。
7、
【正確答案】 B
【答案解析】 酶增強(qiáng)免疫測(cè)定技術(shù)(EMIT)是均相酶免疫測(cè)定技術(shù)。EMIT的基本原理：半抗原與酶結(jié)合成酶標(biāo)半抗原，保留半抗原和酶的活性，當(dāng)酶標(biāo)半抗原與抗體結(jié)合后，所標(biāo)的酶與抗體密切接觸，使酶的活性中心受到影響而活性被抑制，反應(yīng)后酶活力大小與標(biāo)本中的半抗原量呈一定的比例，從酶活力的測(cè)定結(jié)果可推算出標(biāo)本中半抗原的量。
8、
【正確答案】 C
【答案解析】 均相酶免疫測(cè)定是將半抗原或小分子抗原如藥物、激素、毒品、興奮劑等與酶結(jié)合制成酶標(biāo)記物，酶與抗原(半抗原)結(jié)合后仍保留酶和抗原(半抗原)的活性。均相酶免疫測(cè)定操作簡便、快速、適合于自動(dòng)化，應(yīng)用廣泛，不僅可檢測(cè)藥物、激素、毒品、興奮劑等半抗原或小分子抗原，也可測(cè)定大分子蛋白質(zhì)、病毒及細(xì)胞性抗原成分。
最大缺點(diǎn)是易受樣品中非特異的內(nèi)源性酶、酶抑制藥及交叉反應(yīng)物的干擾，而且由于采用競(jìng)爭性結(jié)合分析原理，靈敏度不及異相酶免測(cè)定。
9、
【正確答案】 B
【答案解析】 在雙位點(diǎn)一步法測(cè)定中，應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)，類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象。當(dāng)標(biāo)本中待測(cè)抗原濃度相當(dāng)高時(shí)，過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成夾心復(fù)合物，所得結(jié)果將低于實(shí)際含量。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
10、
【正確答案】 A
【答案解析】 許多化合物可作為HRP的供氧體，在ELISA中常用的供氫體底物為鄰苯二胺(OPD)、四甲基聯(lián)苯胺(FMB)和ABTS。OPD為在ELISA中應(yīng)用最多的底物，靈敏度高，比色方便。
11、
【正確答案】 A
【答案解析】 制備抗體酶結(jié)合物的方法通常有戊二醛交聯(lián)法、過碘酸鹽氧化法和標(biāo)記抗體鑒定法。
12、
【正確答案】 D
【答案解析】 斑點(diǎn)免疫層析試驗(yàn)以硝酸纖維素為載體，利用微孔濾膜的毛細(xì)管作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲移，猶如層析一般。
13、
【正確答案】 B
【答案解析】 化學(xué)發(fā)光是吸收了化學(xué)能使分子激發(fā)而發(fā)射的光，而熒光是吸收了光能使分子激發(fā)而發(fā)射的光。
14、
【正確答案】 C
【答案解析】 鉤狀效應(yīng)即HOOK效應(yīng),是指由于抗原抗體比例不合適而導(dǎo)致假陰性的現(xiàn)象，其中抗體過量叫做前帶效應(yīng);抗原過量叫做后帶效應(yīng)。在等價(jià)帶前后分別為抗體、抗原過剩則影響沉淀物的形成，這種現(xiàn)象稱為帶現(xiàn)象。帶現(xiàn)象在臨床檢驗(yàn)中經(jīng)常出現(xiàn)，特別是ELISA反應(yīng)中。出現(xiàn)在抗體過量時(shí)，稱為前帶，出現(xiàn)在抗原過剩時(shí)，稱為后帶。所以在臨床工作中一定要注意前帶和后帶現(xiàn)象，以免出現(xiàn)假陰性結(jié)果，尤其以前帶效應(yīng)明顯，這種情況可以通過進(jìn)一步稀釋樣本進(jìn)行解決。
15、
【正確答案】 A
【答案解析】 均相酶免疫測(cè)定方法有酶增強(qiáng)免疫測(cè)定技術(shù)(EMIT)和克隆酶供體免疫分析方法。其中，酶增強(qiáng)免疫測(cè)定技術(shù)是最早取得實(shí)際應(yīng)用的酶免疫測(cè)定方法。
16、
【正確答案】 C
【答案解析】 間接法是檢測(cè)抗體最常用的方法，其原理是利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體，只要更換不同的固相抗原，就可以用一種酶標(biāo)抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體。
17、
【正確答案】 E
【答案解析】 免疫滲濾試驗(yàn)和免疫層析試驗(yàn)具有簡便、快速、單份測(cè)定、可立等結(jié)果等優(yōu)點(diǎn)，無需任何儀器設(shè)備，試劑穩(wěn)定，因此多用于急診檢驗(yàn)。這類試驗(yàn)不能準(zhǔn)確定量，所以主要限于檢測(cè)正常體液中不存在的物質(zhì)以及正常含量極低而在特殊情況下異常升高的物質(zhì)。目前臨床檢驗(yàn)中已開展的項(xiàng)目有HCG、抗HCV和抗HIV、HBsAg等，新項(xiàng)目正在不斷發(fā)展中。
18、
【正確答案】 D
【答案解析】 ELISA是在固相載體上包被抗原或抗體后，通過抗原抗體反應(yīng)使酶標(biāo)抗體(或酶標(biāo)抗原)結(jié)合到載體上，經(jīng)洗滌使結(jié)合的酶標(biāo)抗體和游離的酶標(biāo)抗體分離，洗去游離的酶標(biāo)抗體(或酶標(biāo)抗原)。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體。②酶標(biāo)記的抗原或抗體。③酶作用的底物。間接法和捕獲法還使用稀釋的血清標(biāo)本做試劑。戊二醛是一種雙功能團(tuán)試劑，可以使酶與蛋白質(zhì)或其他抗原的氨基通過它而耦聯(lián)。與ELISA的方法相反。
19、
【正確答案】 E
【答案解析】 影響發(fā)光劑標(biāo)記的因素有被標(biāo)記蛋白的性質(zhì)、原料比、標(biāo)記率、溫度。
20、
【正確答案】 B
【答案解析】 在ELISA中，常用的酶為辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(AP)。應(yīng)用AP系統(tǒng)，其敏感性一般高于應(yīng)用HRP系統(tǒng)，空白值也較低。但由于AP較難得到高純度制劑，穩(wěn)定性較HRP低，價(jià)格較HRP高，制備酶結(jié)合物時(shí)得率較HRP低等原因，國內(nèi)在ELISA中一般均采用HRP。
21、
【正確答案】 B
【答案解析】 酶免疫技術(shù)的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物。最常用的固相載體物質(zhì)是聚苯乙烯。
22、
【正確答案】 C
【答案解析】 將抗原或抗體固相化的過程稱為包被。由于載體的不同，包被的方法也不同。如以聚苯乙烯ELISA板為載體，通常將抗原或抗體溶于緩沖液(最常用的為pH9.6的碳酸緩沖液)中，加于ELISA板孔中在4℃過夜，經(jīng)清洗后即可應(yīng)用。如果包被液中的蛋白質(zhì)濃度過低，固相載體表面有能被此蛋白質(zhì)完全覆蓋，其后加入的血清標(biāo)本和酶結(jié)合物中的蛋白質(zhì)也會(huì)部分地吸附于固相載體表面，最后產(chǎn)生非特異性顯色而導(dǎo)致本底偏高。在這種情況下，如在包被后再用1%～5%牛血清白蛋白包被一次，可以消除這種干擾。這一過程稱為封閉。包被好的ELISA板在低溫可放置一段時(shí)間而不失去其免疫活性。
23、
【正確答案】 B
【答案解析】 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)的位點(diǎn)一步法是在雙抗體夾心法測(cè)定抗原時(shí)，如應(yīng)用針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體，則可如圖中所示，在測(cè)定時(shí)可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步。此法不但簡化了操作，縮短了反應(yīng)時(shí)間，如應(yīng)用高親和力的單克隆抗體，測(cè)定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應(yīng)用使測(cè)定抗原的ELISA提高到新水平。
24、
【正確答案】 B
【答案解析】 ELISA抗體夾心法檢測(cè)抗原A時(shí)，固相載體的包被物是未標(biāo)記的抗A抗體。
二、B
1、
【正確答案】 C
【答案解析】 自身紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)可用于HIV抗體、HBsAg的檢測(cè)，靈敏度與間接血凝試驗(yàn)相仿。
【正確答案】 A
【答案解析】 免疫印跡法在艾滋病病毒感染中作為確診試驗(yàn)。
【正確答案】 E
【答案解析】 免疫組織化學(xué)技術(shù)是指酶標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)的抗原進(jìn)行定性、定位和定量測(cè)定的一項(xiàng)技術(shù)。
【正確答案】 B
【答案解析】 檢測(cè)抗原最常用的方法是ELISA(雙抗體夾心法)。
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