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　　(一)核酸的紫外吸收

　　在核酸分子中，由于嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵體系，因而具有獨(dú)特的紫外線吸收光譜，一般在 260nm左右有最大吸收峰，可以作為核酸及其組份定性和定量測定的依據(jù)。

　　(二)核酸的變性、復(fù)性與雜交

　　1.核酸的變性

　　(1)核酸的變性：在理化因素作用下， 核酸分子中的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)松散分開，形成無規(guī)則單鏈結(jié)構(gòu)的過程。變性核酸將失去其部分或全部的生物活性。核酸的變性并不涉及磷酸二酯鍵的斷裂，其一級結(jié)構(gòu)(堿基順序)保持不變。

　　A型題：

　　DNA變性的原因是(　)

　　A.3’，5’磷酸二酯鍵的斷裂

　　B.二硫鍵的斷裂

　　C.互補(bǔ)堿基之間氫鍵斷裂

　　D.堿基甲基化修飾

　　E.多核苷酸鏈解聚

　　『正確答案』C

　　『答案解析』DNA變性是指在某些理化因素的作用下，互補(bǔ)的堿基對間的氫鍵斷裂。

　　(2)DNA變性后，它的一系列性質(zhì)也隨之發(fā)生變化：

　　①增(高)色效應(yīng)：天然狀態(tài)的DNA在完全變性后，紫外吸收(260nm)值升高,即增色效應(yīng)。

　�、赥m值： 隨DNA變性增加，260nm處的紫外光吸收值逐漸增加，該值達(dá)到最大值50%時的溫度稱為核酸的解鏈溫度或融解溫度，用“Tm”表示。

　　Tm值影響因素： GC含量，GC含量越高，Tm值越大;核酸分子量，核酸分子量越大，Tm值也越大。

　　A型題：

　　DNA的解鏈溫度指的是(　)

　　A.A260nm達(dá)到最大值時的溫度

　　B.A260nm達(dá)到最大值時的50%時的溫度

　　C.DNA開始解鏈時所需要的溫度

　　D.DNA完全解鏈時所需要的溫度

　　E.A280nm達(dá)到最大值50%時的溫度

　　『正確答案』B

　　『答案解析』DNA的變性從開始解鏈到完全解鏈，是在一個相當(dāng)窄的溫度范圍內(nèi)完成的，在這一范圍內(nèi)，紫外光吸收值達(dá)到最大值的50%時溫度稱為DNA的解鏈溫度。

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