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人巨噬細胞可從外周血或經(jīng)斑蝥激發(fā)的皮皰液中獲取，也可從肺灌洗液或患者腹膜透析液中分離，但操作繁鎖，得量不多。許多實驗室在進行基礎(chǔ)或配合臨床研究巨噬細胞功能及其與疾病的關(guān)系、或篩檢免疫增強藥物和探討其作用機制時，常選用小鼠腹腔巨噬細胞為研究對象，常用的檢測方法如下。
(一)炭粒廓清試驗
正常小鼠肝中枯否細胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬細胞約吞噬清除10%炭粒，據(jù)此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁(炭粒懸液)，間隔一定時間反復(fù)取靜脈血，測定血中炭粒的濃度，根據(jù)血流中炭粒被廓清的速度，判斷巨噬細胞的功能。
(二)吞噬功能的檢測
巨噬細胞具有較強的吞噬功能，實驗室常用比細菌大的細胞性抗原作為被吞噬顆粒，如雞紅細胞。其檢測原理是將受檢細胞與適量的顆�？乖旌虾�，置37℃保溫0.5～1h，其間時加振搖，最后離心取測定細胞制成涂片，染色鏡檢，分別計數(shù)出吞噬百分比和吞噬指數(shù)。各實驗室應(yīng)根據(jù)自己的條件建立正常參考值。
(三)巨噬細胞溶酶體酶的測定
巨噬細胞富含溶酶體酶，如酸性磷酸酶、非特異性酯酶、溶菌酶等，測定這些酶的活性也是衡量巨噬細胞功能的實用指標之一。
1.酸磷酸酶的測定
(1)硝酸鉛法：本法優(yōu)點是用普通試劑，價格便宜，一般實驗室均有條件做，封片后可較長時間保存，并可用電子顯微鏡研究觀察細胞的超微結(jié)構(gòu)。缺點是細胞必需固定，而且固定條件要求嚴格，如處理不當酶活性易消失，反應(yīng)步驟也較多。
該法基本原理是在適當?shù)拿感詶l件下，巨噬細胞內(nèi)的酸性磷酸酶能使β甘油磷酸鈉水解成磷酸鹽后，后者與硝酸鉛反應(yīng)產(chǎn)生磷酸鉛，而磷酸鉛再與硫酸銨反應(yīng)則形成黑色硫化鉛，沉積在胞漿內(nèi)酸所在處，顯示棕黑色顆粒。酶活性強弱可根據(jù)顆粒的數(shù)量和粗細不同而分級判斷，顆粒數(shù)量少則細的為+，顆粒多而粗的為++，顆粒很多且很粗的為+++。
(2)偶氮法：本法操作簡便，反應(yīng)液中的底物α-萘磷酸鈉被酸性磷酸酶分解后，形成萘酚和磷酸鹽，而萘酚結(jié)構(gòu)中的羥基(-OH)鄰近的活潑碳原子，立即與偶氮染料起反應(yīng)，而產(chǎn)生鮮艷的棕色沉積在酶所在處，缺點是封片后保存時間短。
2.非特異性酶的測定該酶比較穩(wěn)定，酶活性喪失較慢，細胞經(jīng)涂片干燥，置室溫至少可保存半天至一天，因此特別有利于臨床檢驗室采用。
常用α-萘醋酸法，該酶可將-萘醋酸分解成萘酚和醋酸，萘酚迅速與偶染料結(jié)合，形成有色反應(yīng)物而沉積。
(四)巨噬細胞促凝血活性測定
激活巨噬細胞可產(chǎn)生一種與膜結(jié)合的凝血活性因子，加速正常血漿的凝固，為此取已經(jīng)37℃預(yù)溫的正常兔血漿和CaC12混合液，加入經(jīng)粘附單層巨噬細胞的試管中，移置37℃，即時記錄血漿凝固時間。實驗證明當巨噬細胞與LPS、腫瘤相關(guān)抗原或HbsAg等溫育后，可見血漿凝固時間明顯縮短。本法穩(wěn)定方便，也是檢測不同疾病患者巨噬細胞功能的指標之一。
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