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第十八章 免疫學(xué)檢測技術(shù)

　　免疫學(xué)檢測即是根據(jù)抗原、抗體反應(yīng)的原理，利用已知的抗原檢測未知的抗體或利用已知的抗體檢測未知的抗原。由于外源性和內(nèi)源性抗原均可通過不同的抗原遞呈途徑誘導(dǎo)生物機體的免疫應(yīng)答，在生物體內(nèi)產(chǎn)生特異性和非特異性T細胞的克隆擴增，并分泌特異性的免疫球蛋白(抗體)。由于抗體-抗原的結(jié)合具有特異性和專一性的特點，這種檢測可以定性、定位和定量地檢測某一特異的蛋白(抗原或抗體)。免疫學(xué)檢測技術(shù)的用途非常廣泛，它們可用于各種疾病的診斷、療效評價及發(fā)病機制的研究。

　　最初的免疫檢測方法是將抗原或抗體的一方或雙方在某種介質(zhì)中進行擴散，通過觀察抗原-抗體相遇時產(chǎn)生的沉淀反應(yīng)，檢測抗原或抗體，最終達到診斷的目的。這種擴散可以是蛋白的自然擴散，例如環(huán)狀沉淀試驗、單向免疫擴散試驗、雙向免疫擴散實驗。單向免疫擴散試驗就是在凝膠中混入抗體，制成含有抗體的凝膠板，而將抗原加入凝膠板預(yù)先打好的小孔內(nèi)，讓抗原從小孔向四周的凝膠自然擴散，當一定濃度的抗原和凝膠中的抗體相遇時便能形成免疫復(fù)合物，出現(xiàn)以小孔為中心的圓形沉淀圈，沉淀圈的直徑與加入的抗原濃度成正比。

　　利用蛋白在不同酸堿度下帶不同電荷的特性，可以利用人為的電場將抗原、抗體擴散，例如免疫電泳試驗和雙向免疫電泳。免疫電泳首先將抗原加入凝膠中電泳，將抗原各成分依次分散開。然后沿電泳方向平行挖一直線形槽，于槽內(nèi)加入含有針對各種抗原的混合抗體，讓各抗原成分與相應(yīng)抗體進行自然擴散，形成沉淀線。然后利用標準的抗原-抗體沉淀線進行抗原蛋白(或抗體)的鑒別。

　　上述的方法都是利用肉眼觀察抗原-抗體反應(yīng)產(chǎn)生的沉淀，因此靈敏度有很大的局限。比濁法引入沉淀檢測產(chǎn)生的免疫比濁法就是利用濁度計測量液體中抗原-抗體反應(yīng)產(chǎn)生的濁度，根據(jù)標準曲線來計算抗原(或抗體)的含量。該方法不但大大提高了檢測的靈敏度，且可對抗原、抗體進行定量的檢測。

　　免疫印跡法則首先通過電泳分離標準的已知抗原，然后將電泳分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上，浸于待測血清中。如果血清中含有與一種或幾種抗原相對應(yīng)的抗體的話，則在該抗原印跡部位形成免疫復(fù)合物沉淀。在洗去未結(jié)合的抗原和抗體后，在膜上加標記的抗人免疫球蛋白的抗體，此抗體可以和病毒抗原與人抗體形成的免疫復(fù)合物發(fā)生反應(yīng)，最后加入顯色底物(可以是普通顯色劑，化學(xué)發(fā)光劑或放射性同位素等)進行顯色。由于利用了第二種抗體進行了信號放大，并且可以利用高靈敏的顯色方式，靈敏度也得到了很大的提高。目前該方法已經(jīng)利用凝集反應(yīng)檢測抗原-抗體反應(yīng)也是較傳統(tǒng)的手段之一。利用帶有抗原的乳膠顆粒等不溶性的顆粒抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合形成凝集團塊，通過凝集現(xiàn)象，就可以達到檢測的目的。無論是直接凝集法還是間接凝集法都可對抗原或抗體進行檢測。還可以利用二抗對信號進行放大，從而提高檢測的靈敏度。

　　利用補體介導(dǎo)的反應(yīng)(例如溶血反應(yīng))，檢測抗原-抗體反應(yīng)也是過去常用的方法�？贵w與細胞表面抗原相遇，形成紅細胞-抗體復(fù)合物即可使加入反應(yīng)中的補體活化，導(dǎo)致細胞的溶解，此方法可用于紅細胞的各種抗原或相應(yīng)抗體的檢測，此外利用補體反應(yīng)的競爭效應(yīng)，也可對抗原-抗體反應(yīng)進行定量的檢測利用帶有標記(熒光素、同位素、膠體金或酶)的抗體(抗原)檢測抗原-抗體反應(yīng)是目前應(yīng)用最廣泛、最靈敏的方法，使用放射性同位素標記法可使檢測的靈敏度達到pg 級。由于帶標記的抗體能準確而可靠地反映出抗原的位置和數(shù)量，且利用二抗可對信號進行放大，因此該方法可用于抗原定性、定量或定位檢測。

　　以下是幾種常用的免疫學(xué)技術(shù)：

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