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細(xì)胞因子的檢測

　　細(xì)胞因子檢測是判斷機(jī)體免疫功能的一個重要指標(biāo)，因而具有重要的實(shí)驗(yàn)室研究價值，同時還可能在臨床上有諸多實(shí)用價值、包括許多疾病的診斷、病程觀察、療效判斷及細(xì)胞因子治療監(jiān)測等。但是，由于細(xì)胞因子在體內(nèi)的含量甚微，給細(xì)胞因子的檢測帶來困維。目前細(xì)胞因子的主要檢測方法包括：

　　(一)依賴性細(xì)胞株

　　一些腫瘤細(xì)胞株必須依賴于細(xì)胞因子方能在體外增殖，如DTLL細(xì)胞株依賴IL-2;FDC-PL細(xì)胞株依賴于小鼠IL-3;TF-1細(xì)胞株依賴于人IL-3和人GM-CSF，因而可利用這些依賴細(xì)胞株檢測相應(yīng)的細(xì)胞因子。這種方法敏感性高，特異性也不錯，但可異的是并非所有細(xì)胞因都能找到相應(yīng)的細(xì)胞株，因而限制了它的應(yīng)用。

　　(二)功能檢測

　　利用一些細(xì)胞因子的功能特性，可建立相應(yīng)的活性測定方法，如干擾素的抑制病毒感染效應(yīng)，腫瘤壞死因子對L929細(xì)胞的殺傷作用等。這樣的方法敏感性高，但特異性不夠，容易受一些擾因素的影響。

　　(三)免疫測定

　　利用抗原抗體反應(yīng)的原理，制備出抗細(xì)胞因子的單克隆抗體或多克隆抗體，可進(jìn)行細(xì)胞因子的免疫檢測。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)、操作簡便，缺點(diǎn)是靈敏度不夠，且不能代表活性測定的結(jié)果。從目前的國際發(fā)展趨勢來看，已研制出了高靈敏度、特異性高、高度配套的細(xì)胞檢測試劑盒，其應(yīng)用范圍正在擴(kuò)大，有良好的發(fā)展前景。

　　(四)功能測定與抗體抑制

　　為解決功能定特異性不夠，免疫測定靈敏度不夠的問題，可將兩種方法結(jié)合起來，利用各自的長處，有可能得到較為可靠的結(jié)果。在這一方法中，所用的抗細(xì)胞因子抗體必須是具有中和活性的抗體。

　　(五)分子雜交技術(shù)

　　利用分子生物學(xué)技術(shù)，制備出細(xì)胞因子的基因探針，可通過分子雜交技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)，這是一種高度敏感和高度特異的檢測技術(shù)，目前在實(shí)驗(yàn)室研究中使用較廣，其缺點(diǎn)是操作較為繁瑣，測定結(jié)果只能代表細(xì)胞因子基因的表達(dá)，而不能代表活性細(xì)胞因子的水平。

　　(六)多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)(PCR)

　　PCR(polymerasechain reation)技術(shù)是一種高效的基因體外擴(kuò)增技術(shù)，目前PCR技術(shù)已用于細(xì)胞因子的檢測中，首先將細(xì)胞因子產(chǎn)生細(xì)胞的RNA提取出來，再經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，以cDNA為模板，在細(xì)胞因子引物的引導(dǎo)下，即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增。這種技術(shù)是迄今最敏感的細(xì)胞因子檢測技術(shù)，操作也較簡便，缺點(diǎn)與分子雜交技術(shù)類似，并且不容易對細(xì)胞因子表達(dá)水平進(jìn)行定量。

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