2014《中藥學專業(yè)知識二》中藥鑒定學：強心苷

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　　強心苷的提取分離

　　(一)提取

　　提取原生苷，首先要注意抑制酶的活性，防止酶解，提取時避免酸堿的影響。提取次生苷，可利用酶解或酸水解的方法，提高目標提取物的產(chǎn)量。

　　常用甲醇或70~80%的乙醇作溶劑。原料含脂類雜質(zhì)較多時，可先用石油醚或溶劑汽油脫脂;原料含葉綠素較多時，可用稀堿液皂化法，靜置析膠法，活性炭吸附法除去葉綠素。

　　(二)分離

　　強心苷濃縮液，可用氯仿和不同比例的氯仿-甲醇(乙醇)溶液依次萃取，將強心苷按極性大小分為幾部分，再采用溶劑萃取法、逆流分溶法和色譜分離法分離。分離親脂性單糖苷、次苷和苷元，一般選用吸附色譜，常以硅膠和氧化鋁為吸附劑。

　　強心苷水解反應

　　化學方法主要有酸水解，堿水解;生物方法有酶水解。

　　1.酸水解：

　　·溫和酸水解：對苷元影響小，不致引起脫水反應，對不穩(wěn)定的α-去氧糖亦不致分解，故常得到雙糖和叁糖。此法不適用于16位有甲�；�的洋地黃強心苷類。

　　·強烈酸水解：增加作用時間或同時加壓才能得到一定量葡糖，但易得到縮水苷元。

　　·氯化氫丙酮法：此法適用于多數(shù)Ⅱ型強心苷水解，得到原生苷元和糖衍生物。

　　2.酶水解：能水解除去分子中的葡萄糖而保留α-去氧糖。

　　3.堿水解：堿試劑可使強心苷分子中的�；�水解，內(nèi)酯環(huán)裂開、△20(22)轉(zhuǎn)位及苷元異構化等。

　　·�；�水解：水解脫去強心苷中�；�。

　　·內(nèi)酯環(huán)的水解：水溶液中，NaOH或KOH可使內(nèi)酯環(huán)開裂，酸化后又閉環(huán);醇溶液中，NaOH或KOH使內(nèi)酯環(huán)開環(huán)并異構化，酸化后亦不可逆。

　　強心苷·顏色反應

　　根據(jù)顏色反應發(fā)生在分子的不同部位可以分為以下數(shù)種：

　　作用于甾體母核的反應 一般在無水條件下經(jīng)酸作用，能產(chǎn)生各種顏色反應。常見有：

　　乙酐濃硫酸(Liebermann-Burchard)反應：取樣品溶于冰乙酸，加濃硫酸-乙酐(1∶20)數(shù)滴→紅→紫→藍→綠→污綠等變化，最后褪色。

　　Salkowski反應：將樣品溶于氯仿，加濃硫酸靜置，;硫酸層呈血紅色或藍色，氯仿層有綠色熒光。

　　Tschugaev反應：取樣品溶于冰乙酸，加幾粒氯化鋅及乙酰氯共熱，或取樣品溶于氯仿，加冰乙酸、乙酰氯和氯化鋅煮沸，反應液呈紫紅→藍→綠的變化。

　　Rosen-Heimer反應：將樣品溶液點在濾紙上，噴25%三氯乙酸乙醇溶液，加熱至60℃呈紅色至紫色。

　　Kahlenberg反應：將樣品溶液點在濾紙上，噴20%五氯化銻的氯仿溶液(不含乙醇和水)，于60~70℃加熱3～5min即可顯灰藍、藍、灰紫等顏色。

　　作用于α、β不飽和內(nèi)酯環(huán)的反應 可用于區(qū)別甲、乙型強心苷。甲型強心苷在堿性醇溶液中，能與下列活性亞甲基試劑作用而顯色，乙型強心苷無此類反應。

　　Legal(亞硝酰鐵氰化鈉)反應：取樣品1～2mg，溶在2～3滴吡啶中，加1滴3%亞硝酰鐵氰化鈉溶液和1滴2mol/L的氫氧化鈉溶液，反應液呈深紅色并漸漸褪去。

　　Raymond(間二硝基苯)反應)：取樣品約1mg，以少量50%乙醇溶解后加1%間二硝基苯乙醇溶液0.1ml，搖勻后再加20%NaOH溶液0.2ml →紫紅色。

　　Kedde(3，5-二硝基苯甲酸)反應)：取樣品的醇溶液于試管中，加3，5-二硝基苯甲酸試劑3～4滴 →紅色或紫紅色。

　　Baljet(堿性苦味酸試劑)反應)：取樣品的醇溶液于試管中，加入堿性苦味酸試劑數(shù)滴 →橙色或橙紅色。

　　以上反應均呈紅或紫紅、橙紅色。

　　作用于α-去氧糖的反應

　　Keller-Kiliani(K-K)反應 乙酸層顯藍色…此反應是α-去氧糖的特征反應，對游離的α-去氧糖或α-去氧糖與苷元連結的苷都能呈色。

　　占噸氫醇反應 取樣品少許，加占噸氫醇試劑1ml，置沸水浴中3min，只要分子中有α-去氧糖都能呈紅色。本反應非常靈敏，可用于定量。

　　對-二甲氨基苯甲醛反應 將樣品的醇溶液點在濾紙上，噴對-二甲氨基苯甲醛試劑，于90℃加熱30s，分子中含α-去氧糖的強心苷可顯灰紅色斑點。

　　過碘酸-對硝基苯胺反應 取樣品的醇溶液點在濾紙上，先噴過NaIO3水溶液，于室溫放置10min，再噴對硝基苯胺試液，則迅速在灰黃色背底上出現(xiàn)深黃色斑點，置紫外光下觀察則為棕色背底上現(xiàn)黃色熒光斑點。如再噴以5%NaOH甲醇溶液，則色點轉(zhuǎn)為綠色。

　　強心苷波譜分析

　　強心苷元的UV光譜

　　具有△αβ五元內(nèi)酯環(huán)的強心苷元即甲型強心苷元在217～220nm(logε4.20-4.24)處呈現(xiàn)最大吸收。

　　具有△αβ，δ六元內(nèi)酯環(huán)的強心苷元即乙型強心苷元在295～300nm (logε約3.93)處有特征吸收。

　　強心苷元的IR光譜

　　△αβ五元不飽和內(nèi)酯環(huán)的γC=O峰為特征吸收峰，一般在1800～1700cm-1處有兩個強吸收峰，其中在低波數(shù)的為正常的吸收峰，在高波數(shù)的為非正常的吸收峰。

　　△αβ，γδ六元內(nèi)酯環(huán)的強心苷元的C=O紅外吸收峰與五元內(nèi)酯環(huán)相同，也有兩個吸收峰，但由于環(huán)內(nèi)共軛程度增高，導致兩個吸收峰向低波數(shù)位移。

　　NMR譜

　　1H-NMR光譜：可用來判斷甲基、醛基、羥甲基等上的質(zhì)子特征，具體信號特征如下：

　　1.△αβ-γ-內(nèi)酯環(huán)：C22-H在δ6.00～5.60內(nèi)，呈寬的單峰，C21-2H在δ5.00～4.50ppm內(nèi)，呈AB型四重峰，J=18Hz，或?qū)拞畏寤蛉�重峰�?/P>

　　2.C10和C13上的甲基在δ1.00ppm左右均為單峰。

　　3.C10上連結的醛基在δ10.0～9.50ppm內(nèi)為單峰。

　　4.C10上連結的羥甲基乙�；�后，在δ4.50～4.00ppm內(nèi)呈AB型四重峰，J=12Hz。

　　5.C16位上無含氧取代時，該位上的二個質(zhì)子在δ2.50～2.00ppm內(nèi)呈m峰，C17-H在δ2.80ppm左右，為m峰或dd峰，J=9.5Hz。

　　6.C3-H為m峰，在苷元中約在δ3.90ppm，成苷后向低場位移。

　　7.糖部分除常見的糖外還有一些特殊的糖，均有一些特征信號可以識別。

　　13C-NMR光譜： 對研究強心苷結構也十分有用，此外還有下列用途：

　　1. 根據(jù)13C-NMR可以用來判斷甾體A/B環(huán)的構象。

　　2. C3-OH的構型也可用13C-NMR來判斷。

　　3. 可以確定強心苷分子中各糖基連接順序。

　　4. 可以判斷強心苷中糖基之間的連接位置。

　　MS譜

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