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降壓物質(zhì)檢查法
本法系比較組胺對照品(S)與供試品(T)引起麻醉貓(或狗)血壓下降的程度,以判定供試品中所含降壓物質(zhì)的限度是否符合規(guī)定。
組胺對照品溶液的配制精密稱取磷酸組胺對照品適量,按組胺計算,加水溶解使成每1ml中含1.0mg的溶液,分裝于適宜的容器內(nèi),4—8℃貯存,如無沉淀析出,可在3個月內(nèi)使用。
對照品稀釋液的配制臨用前,精密量取組胺對照品溶液適量,用氯化鈉注射液配成每1ml中含組胺0.5μg的稀釋液。
供試品溶液的配制按正文規(guī)定的劑量,配成適當濃度的供試品溶液;試驗時,一般要求供試品溶液與對照品稀釋液的注入體積應(yīng)相等。
檢查法取健康無傷、體重2kg以上的貓(或體重5kg以上的狗),雌者無孕,用適宜的麻醉劑(如巴比妥類)麻醉后,固定于保溫手術(shù)臺上,分離氣管并插入插管以使呼吸暢通,必要時可行人工呼吸。在一側(cè)頸動脈插入連接測壓計的動脈套管,管內(nèi)充滿適宜的抗凝劑溶液,以記錄血壓,也可用其他適當儀器記錄血壓。在一側(cè)股靜脈內(nèi)插入靜脈插管,供注射藥液用。試驗中應(yīng)注意保持動物體溫。全部手術(shù)完畢后,將測壓計調(diào)節(jié)到與動物血壓相當?shù)母叨?一般為13.3—16.0kPa),開啟動脈夾,待血壓穩(wěn)定后,即可進行藥液注射。各次注射速度應(yīng)相同,每次注射后立即注入一定量的氯化鈉注射液,相鄰兩次注射的間隔時間應(yīng)一定(3—5分鐘),每次注射應(yīng)在前一次反應(yīng)恢復穩(wěn)定以后進行。自靜脈輪流注入上述對照品稀釋液,劑量按動物體重每1kg注射組胺0.05μg、0.1μg及0.15μg,每個劑量應(yīng)各重復2—3次,如0.1μg劑量所致的血壓下降值均不小于2.67kPa,同時相應(yīng)各劑量所致反應(yīng)的平均值有差別,可認為該動物的靈敏度符合規(guī)定。
取對照品稀釋液按動物體重每1kg注射組胺0.1μg的劑量(ds),供試品溶液按正文中規(guī)定的劑量(dT),照下列次序注射一組4個劑量:ds、dT、dT、ds.然后以第一與第三、第二與第四劑量所致的反應(yīng)分別比較。如dT所致的反應(yīng)值均不大于ds所致反應(yīng)值的一半,即認為供試品的降壓物質(zhì)檢查符合規(guī)定。否則應(yīng)按上述次序繼續(xù)注射一組4個劑量,并按相同方法分別比較兩組內(nèi)各對ds、dT劑量所致的反應(yīng)值;如dT所致的反應(yīng)值均不大于ds所致的反應(yīng)值,仍認為供試品的降壓物質(zhì)檢查符合規(guī)定;如dT所致的反應(yīng)值均大于ds所致的反應(yīng)值,即認為供試品的降壓物質(zhì)檢查不符合規(guī)定;否則應(yīng)另取動物復試。如復試的結(jié)果仍有dT所致的反應(yīng)值大于ds所致的反應(yīng)值,即認為供試品的降壓物質(zhì)檢查不符合規(guī)定。
所用動物經(jīng)靈敏度檢查如仍符合規(guī)定,可繼續(xù)用于降壓物質(zhì)檢查。
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