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抗原抗體反應(yīng)
將抗原(標(biāo)準(zhǔn)品和受檢標(biāo)本)、標(biāo)記抗原和抗血清按順序定量加入小試管中，在一定的溫度下進(jìn)行反應(yīng)一定時(shí)間，使競(jìng)爭(zhēng)抑制反應(yīng)達(dá)到平衡。不同質(zhì)量的抗體和不同含量的抗原對(duì)溫育的溫度和時(shí)間有不同的要求。
如受檢標(biāo)本抗原含量較高，抗血清的親和常數(shù)較大，可選擇較高的溫度(15～37℃)進(jìn)行較短時(shí)間的溫育，反之應(yīng)在低溫(4℃)作較長(zhǎng)時(shí)間的溫育，形成的抗原抗體復(fù)合物較為牢固。
抗血清的檢定
含有特異性抗體的抗血清是放射免疫分析的主要試劑，常以抗原免疫小動(dòng)物誘發(fā)產(chǎn)生多克隆抗體而得�？寡宓馁|(zhì)量直接影響分析的靈敏度和特異性�？寡遒|(zhì)量的指標(biāo)主要有親和常數(shù)、交叉反應(yīng)率和滴度。
1.親和常數(shù)親和常數(shù)(affinityconstant)常用K值表示。它反映抗體與相應(yīng)抗原的結(jié)合能力。K值的單位為mol/L，即表示 1mol抗體稀釋至若干L溶液中時(shí)，與相應(yīng)的抗原結(jié)合率達(dá)到50%.抗血清K值越大，放射免疫分析的靈敏度、精密和準(zhǔn)確度越佳�？寡宓腒值達(dá)到 109～1012mol/L才適合用于放射免疫分析。
2.交叉反應(yīng)率放射免疫分析測(cè)定的物質(zhì)有些具有極為類似的結(jié)構(gòu)，例如甲狀腺素的T3、T4，雌激素中的雌二醇、雌三醇等。針對(duì)一種抗原的抗血清往往對(duì)于其類似物會(huì)發(fā)生交叉反應(yīng)。
因此交叉反應(yīng)率反映抗血清的特異性，交叉反應(yīng)率過大將影響分析方法的準(zhǔn)確性。交叉反應(yīng)率的測(cè)定方法為用與抗血清相應(yīng)抗原及其類似物用同法進(jìn)行測(cè)定，觀察置換零標(biāo)準(zhǔn)管50%時(shí)的量。以T3抗血清為例，置換零標(biāo)準(zhǔn)50%T3為1ng，其類似物T4則需 200ng，則其交叉反應(yīng)率為：1/200=0.5%.
3.滴度滴度系指將血清稀釋時(shí)能與抗原發(fā)生反應(yīng)的最高稀釋度。它反映抗血清中有效抗體的濃度。在放射免疫分析中滴度為在無受檢抗原存在時(shí)，結(jié)合50%標(biāo)記抗原時(shí)抗血清的稀釋度。
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