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　　免疫電泳技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)

　　(一)加快了沉淀反應(yīng)的速度;

　　(二)電場規(guī)定了抗原抗體的擴(kuò)散方向，使其集中，提高了靈敏度;

　　(三)可將某些蛋白組分根據(jù)其帶電荷的不同而將其分開，再分別與抗體反應(yīng)。

　　對流免疫電泳

　　對流免疫電泳是免疫電泳技術(shù)中的一種，還包括免疫電泳、火箭電泳等方法。

　　在pH值8.6的瓊脂凝膠中，抗體球蛋白只帶有微弱的負(fù)電荷，而且它分子又較大，所以泳動慢，受電滲作用的影響也大，往往不能抵抗電滲作用，故在電泳時，反而向負(fù)極倒退。而一般抗原蛋白質(zhì)常帶較強(qiáng)的負(fù)電荷，分子又較小，所以泳動快，雖然由于電滲作用泳動速度減慢，但仍能向正極泳動。如將抗原置陰極，抗體置陽極，電泳時，兩種成分相對泳動，一定時間后抗原和抗體將在兩孔之間相遇，并在比例適當(dāng)?shù)牡胤叫纬扇庋劭梢姷某恋砭�。這樣由于電泳的作用，不僅幫助抗體定向移動，因而加速了反應(yīng)的出現(xiàn)，而且也限制了瓊脂擴(kuò)散時，抗原抗體向四周自由擴(kuò)散的傾向，因而也提高了敏感性，本法比瓊脂擴(kuò)散法的靈敏度要高10～16倍，而且反應(yīng)時間短，可用于各種蛋白的定性和半定量測定。

　　火箭免疫電泳

　　火箭免疫電泳(rocket immunoelectrophoresis，RIEP)是將單向免疫擴(kuò)散和電泳相結(jié)合的一種定量檢測技術(shù)。

　　電泳時，含于瓊脂凝膠中的抗體不發(fā)生移動，而在電場的作用下促使樣品中的抗原向正極泳動。當(dāng)抗原與抗體分子達(dá)到適當(dāng)比例時，形成一個形狀如火箭的不溶性免疫復(fù)合物沉淀峰，峰的高度與撿樣中的抗原濃度呈正相關(guān)。因此，當(dāng)瓊脂中抗體濃度固定時，以不同稀釋度標(biāo)準(zhǔn)抗原泳動后形成的沉淀峰為縱坐標(biāo)，抗原濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品的沉淀峰長度即可計(jì)算出待測抗原的含量;反之，當(dāng)瓊脂中抗原濃度固定時，便可測定待測抗體的含量(即反向火箭免疫電泳)。

　　免疫電泳法

　　免疫電泳法是指利用凝膠電泳與雙向免疫擴(kuò)散兩種技術(shù)結(jié)合的實(shí)驗(yàn)方法。在電場作用下標(biāo)本中各組分因電泳遷移率不同而分成區(qū)帶，然后沿電泳平行方向?qū)⒛z挖一溝槽，將抗體加入溝槽內(nèi)，使抗原與抗體相互擴(kuò)散而形成沉淀線。根據(jù)沉淀線的數(shù)量、位置及形狀，以分析標(biāo)本中所含組分的性質(zhì)，本實(shí)驗(yàn)常用于抗原分析及免疫性疾病的診斷。此法在微量的基礎(chǔ)上具有分辨率高，靈敏度高，時間短，是很理想的分離和鑒定蛋白質(zhì)混合物的方法。用于抗原、抗體定性及純度的測定。

　　免疫固定電泳

　　免疫固定電泳是一種包括瓊脂凝膠蛋白電泳和免疫沉淀兩個過程的操作。血清IFE可檢測IgG、IgM、IgA等及κ輕鏈、λ輕鏈。原理是將樣本在瓊脂平板上作區(qū)帶電泳，分離后其上覆蓋抗血清濾紙，濾紙分別含抗κ輕鏈、抗λ輕鏈，或抗各類重鏈抗血清，當(dāng)抗體與某區(qū)帶中的單克隆Ig結(jié)合，可形成免疫復(fù)合物沉淀，即固定，再通過漂洗與染色，呈現(xiàn)濃而窄的著色區(qū)帶，即可判別單Ig的輕鏈和重鏈的類別。血清樣本要求使用免疫項(xiàng)目藍(lán)色管采集靜脈血，避免溶血。

　　交叉免疫電泳

　　用瓊脂糖作支持物，先將抗原經(jīng)電泳展開，然后在同一玻板上澆注含抗體的瓊脂糖凝膠，在后一個凝膠中進(jìn)行第二次電泳(與第一次電泳方向垂直)。這種方法實(shí)際上是在凝膠電泳后進(jìn)行免疫電擴(kuò)散。不同抗原形成互相獨(dú)立的峰狀免疫沉淀，至最適抗原/抗體比值處停止運(yùn)動，沉淀峰的高度和面積與抗原量成比例關(guān)系。用此法可進(jìn)行各種抗原的定量測定。

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